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低温研磨机正确的实验步骤分享
发布时间:2018-08-30   点击次数:399次
   低温研磨机正确的实验步骤分享
  低温研磨机又叫全自动多样品冷冻研磨仪,和液氮粉碎机类似,原理就是先把常温下呈韧性、难以粉碎的物质,冷冻到脆化点以下,然后在低温研磨机内被研磨到所需的细度,而且原成分不会破坏。并且在常温下易燃易爆的物质,也能低温粉碎,效果更为显著。
  工作原理:
  低温研磨机利用低温冻结力,机械撞击力,物里摩擦力将样品磨碎。
  系统构成:
  低温研磨机拥有五大系统,样本研磨系统、液氮贮存系统、液氮控制系统、电路控制系统、保温及保冷系统。
  应用范围:
  低温研磨机广泛运用于生物/食物/农业/医药品/化学/合成材料/工程/电子/建筑原料/玻璃/陶瓷等行业。
  低温研磨机实验步骤:
  1、先将低温研磨机上的制冷模块预先置于-20℃,使用时取出安装好。将研磨珠去RNA酶处理。
  2、随机抽取小鼠的尾巴100μg,把样本剪成尽可能小段,置于无RNA酶的2研磨单位离心管中(选择耐液氮冷冻管子),同时加入1颗5号研磨珠和2颗3号研磨珠(如果选择1.5研磨单位离心管,只需要加入4-5颗3号研磨珠)。
  3、放置于液氮中一起浸泡3分钟,取出放置于预冷模块中,在低温研磨机上选择13单位频振研磨60s。(该步骤可以根据研磨的细微程度要求可以再重复一遍)。
  4、把研磨好的样本加入0.06ml的PBS0.14ml的RNAiso Plus(此处选择PBS,可以根据实验需要加入其他提取液,如1ml TRIzol等),继续置于低温研磨机上选择13单位频振研磨60s。样本将处于糊状。(其他提取试剂有可能会出现泡沫,不影响实验)。
  5、取出研磨管,放入冷冻离心机中,于4度,12000g离心10分钟。
  6、小心吸取上清液0.1ml至新的1.5研磨单位离心管中,盖上管盖,在室温上孵育15分种,使样品充分裂解至匀浆液较透明,如果仍有少量颗粒属于正常情况,不影响RNA提取质量和得率。
  7、在研磨单位离心管中加入0.02ml氯,盖紧管盖,振荡混匀并将其在冰上孵育15分种,于4度,12000g离心15分钟。离心后混合物分层:上清层,中间层,下层;RNA存在于上清层中。
  8、将上清层小心转移到一干净的离心管中,加入等体积冰浴的异丙醇,颠倒振荡混匀,将混合的样品在-20度条件,孵育20分种,于4度,12000g离心10分钟。RNA沉淀通常形成片状沉淀附着于管壁或管底。小心弃去上清,用1ML的冰浴75%的乙醇洗涤RNA沉淀一次,颠倒洗涤低温研磨机的离心管管壁,并旋涡振荡样品,尽可能让沉悬浮,于4度,12000g离心5分钟,再次去除上清,晾干沉淀。
  10、在阴凉处适度干燥RNA沉淀(避免过分干燥,那样会降底它的可溶性)。
  11、低温研磨机用适量(一般可用0.01—0.02ml)的无RNA酶水或TE溶液来溶解RNA。抽提好的RNA,保存于-70度。

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